谈谈：表位鉴定：抗体筛选的关键步骤-

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使用表面等离子共振(SPR)的表位鉴定可以用于早期抗体药物的筛选。本文详细介绍了如何使用SPR鉴定不同的抗体是否识别相同的抗原表位进行抗原表位鉴定，以及如何用它进行疫苗、治疗性抗体以及诊断试剂的开发。

    表位鉴定在抗体开发过程中的作用是什么？

    治疗性单克隆抗体(mAb)在生物制药市场中占有很大的份额，占治疗性蛋白质销售额的50%以上，并且还在逐年增长。在开发新疫苗、治疗性抗体和诊断试剂的过程中，选择具有适当亲和力、特异性和生物物理特性的mAb至关重要。

    在表位鉴定中，针对同第一个抗体原的特异性mAb与一组中的所有mAb成对进行测试，以评估它们是否阻断彼此与抗原特定位点的结合。阻断与相同表位结合的mAb被“合并”在一起。抗体药物开发的早期阶段通常会产生许多线索，这意味着选择最佳候选药物进行进一步研究至关重要。同一个bin中的mAb通常具有相似的功能，因此表位bin可以将选择范围缩小到更少的候选者可供研究人员选择。。另外，尽管相同bin的抗体能够与结合相同的抗原位点，但它们可能具有不同的作用机制，这对于治疗某些类型的癌症和传染病至关重要。表位多样性对于扩大知识产权(IP)保护也很重要。

    可通过哪些分析策略更明智地选择抗体？

    近些年，生物工程得到了快速发展，科学家目前可针对日益复杂的靶标或疾病途径设计新型抗体。抗体已从简单的mAb演变为更复杂的形式，例如BITES、多特异性抗体、抗体偶联药物等。这增加了分析负担，并提高了对更先进分析技术的需求。为了应对这些挑战，生物传感器已被纳入药物发现工作流程。自1990年代初以来，基于表面等离子共振(SPR)的生物传感器已用于表位鉴定。

    使用传统的ELISA和放射免疫分析(RIA)进行表位鉴定需要大量时间来纯化抗体和开发标记方法。使用无标记生物传感器的表位鉴定检测可以以相对低的成本和高通量自动化的方式筛选候选分子，从而实现高效的候选药物优化和抗体对鉴定。

    表面等离子共振(SPR)检测方法建立

    通过?SPR?进行表位鉴定有一系列成熟的方案。与?ELISA?方法及常规检测方法类似，一致SPR使用一种抗原及与之结合的两种待测抗体进行检测。Biacore 8K和Biacore 8K+?与Biacore Insight 结果分析软件相结合，并利用全新?BiacoreInsightEpitopeBinningExtension，提供了三种通用的检测方式：夹心法、预混合法和串联法（图1），作为预置方案进行表位鉴定。

                               
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    图1.?利用a)夹心检测、b)预混合检测和c)串联检测进行表位鉴定示意图。所有这三种检测形式都需要将第一个抗体（a、b）或抗原(c)固定到传感器芯片表面，然后依次按顺序进样抗原和第二个抗体(a)，或进样预混合的抗体(b)或第两个抗体(c)。

    （后续全文请参见）